大氣壓離子化技術(API)是一類軟離子化方式,它的出現,成功地解決了二手LC-MS的接口問題,并逐漸發(fā)展成為成熟的技術。 二手LC-MS液質聯用API技術 主要包括離子噴霧離子化(ISI)、大氣壓化學離子化(APCI)和電噴霧離子化(ESI)3種模式。它們的共同點是樣品的離子化在處于大氣壓下的離子化室完成,離子化效率高,大大增強了分析的靈敏度和穩(wěn)定性。ESI,ISI和APCI,3種電離方式同時可作為二手LC-MS的接口。
二手LC-MS液質聯用-離子噴霧技術ISI
大多二手LC-MS液質聯用都要求有盡可能高的LC流速達到接口,目前ISI接口的上佳流速可達到50~200u1-min比原來的提高了10~20倍。在柱子出口和ESI探針間加一個溶劑N分離器可使柱流速從Iml.min減少到100ul.min進入接口探針而對響應無不良影響。
當樣品有限時,可應用在低于1ulmin流速下有效工作的納(nano)一ESI接口。有靜態(tài)及動態(tài)兩種nano-ESI接口,靜態(tài)nano-ESI裝置常特殊應用于鑒定蛋白質。而動態(tài)nano-ESI裝置與毛細管電泳nano-LC微毛細管LC或毛細管電色譜聯用。流速常在30~1000nl.min.
二手LC-MS液質聯用-大氣壓化學離子化APCI技術
用于二手LC-MS液質聯用的APCI技術與傳統的化學電離接口不同,它并不采用諸如甲烷一類的反應氣體,而是借助電暈放電啟動一系列氣相反應以完成離子化過程,就其原理,它也可被稱為放電電離或等離子電離。從二手液相色譜流出的樣品溶液進入一具有霧化氣套管的毛細管,被氮氣流霧化,通過加熱管時被氣化。在加熱管端進行電暈放電,溶劑分子被電離,充當反應氣,與樣品氣態(tài)分子碰撞,經過復雜的反應過程,樣品分子生成準分子離子。
二手LC-MS液質聯用-電噴霧電離ESI
用于二手LC-MS液質聯用的ESI技術過程中大致可以分為液滴的形成,去溶劑化,氣相離子的形成3個階段。
在ESI中,離子的形成是被測分子在帶電液滴的不斷收縮過程中噴射出來的,即離子化是在液態(tài)下完成的。經二手液相色譜分離的樣品溶液流入離子源。在N2流下汽化后進入強電場區(qū)域,強電場形成的庫侖力使小液滴樣品離子化,借助于逆流加熱N2分子離子顆粒表面液體進一步蒸發(fā),使分子離子相互排斥形成微小分子離子顆粒。這些離子可能是單電荷或多電荷,這取決于所得的帶有正、負電荷的分子中酸性或堿性基團的體積和數量。多電荷離子峰的形成使質量范圍為3000u的四極桿濾過器質譜儀也能檢測到生物大分子的準確分子量。
在電噴霧過程中,溶液中一種極性離子(比如正離子)隨著噴出的霧滴而離去,相反極性的離子(比如負離子)則留在毛細管的溶液中,如果毛細管為金屬材料并與高壓電源(Ve)的一極相連,那么留在毛細管中的這些離子會在金屬管壁上發(fā)生氧化或還原反應,通過這些電化學反應使溶液中電荷消失,從而維持連續(xù)地噴霧,例如OH-在金屬管壁上發(fā)生以下電化學反應:伴隨電化學反應會有氣體產生,因此在電路的連接上應考慮此因素,否則在毛細管中會出現氣泡,影響電噴霧的穩(wěn)定性。